PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù)已成為分子生物學(xué)研究必備技能,DNA聚合酶是PCR能否成功的關(guān)鍵。從早期被發(fā)現(xiàn)的Taq DNA聚合酶到現(xiàn)在新酶的發(fā)現(xiàn)和對(duì)舊酶的改造,DNA聚合酶的保真性、特異性、靈敏度等都獲得了明顯的改進(jìn)。
隨著相關(guān)研究技術(shù)的深入和研究樣本越發(fā)復(fù)雜,在基因克隆、二代測(cè)序、定點(diǎn)突變等實(shí)驗(yàn)中,都面臨著更加嚴(yán)苛的PCR結(jié)果準(zhǔn)確性要求。因此,對(duì)DNA聚合酶的保真性要求日益提高。超保真DNA聚合酶有聚合中心和酶切中心,聚合中心具有5'→3'的DNA聚合酶活性,可沿 5'→3'方向催化合成 DNA;酶切中心具有3'→5'外切酶活性,即校正活性,可以進(jìn)行堿基錯(cuò)配的修復(fù),保證DNA復(fù)制的忠實(shí)性。
超保真DNA聚合酶工作原理示意圖
PCR過程中錯(cuò)配的核苷酸會(huì)從聚合中心進(jìn)入酶切中心被切除(圖a、b);
切除后此位點(diǎn)會(huì)重新結(jié)合正確的核苷酸,繼續(xù)從5’到3’進(jìn)行精準(zhǔn)復(fù)制(圖c)。
超保真酶品類繁多,如何篩選一款適合自己的呢?
GenStar? SuperNova系列,性價(jià)比之王,專治超保真DNA聚合酶選擇困難癥。
GenStar? SuperNova系列五大特點(diǎn)
1、保真度超高:保真度是 Taq DNA Polymerase 的80倍;
2、延伸速度快:延伸速度約為 15-30 s/kb,不超過 1 min/kb;
3、擴(kuò)增性能優(yōu):長片段擴(kuò)增能力強(qiáng),且可高效擴(kuò)增復(fù)雜基因組模板和高 GC 模板;
4、模板適用性好:適用于多種物種來源模板的擴(kuò)增;
5、應(yīng)用范圍廣:適用于基因克隆、高通量測(cè)序、定點(diǎn)突變等;
優(yōu)化的延伸因子,提高擴(kuò)增速度和延伸性能
SuperNova DNA Polym-erase延伸速度約為 15-30 s/kb,簡單模板擴(kuò)增長度可達(dá)20 kb,復(fù)雜模板可達(dá)13 kb
SuperNova DNA Polymerase擴(kuò)增效率高
復(fù)雜模板(如GC-rich)擴(kuò)增能力強(qiáng),可選擇產(chǎn)品中配備的High-GC Enhancer,可進(jìn)一步提高擴(kuò)增效率
模板適用性廣泛
適用于多物種來源模板的擴(kuò)增,滿足不同科研需求。